传代培养是组织培养常规保种方法之一。贴壁细胞生长增殖形成单层细胞后，会 进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触 抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。这时需 要进行分离培养，细胞由原培养瓶按一定比例稀释后，分种到新的培养瓶中继续培养， 这一过程就叫细胞传代。胰酶是一种蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，将细胞膜 和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离，贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细 胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。传代要在严格的无菌条件下进 行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡 普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。细胞凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系 列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋 亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上，凋亡细胞与周围细胞脱离接触， 细胞变圆，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新 月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体，凋亡小 体最后被吞噬细胞吞噬消化。在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内 切酶活化，活性增加。核 DNA 随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为 180-200bp 或它的整倍数的各种片断。如果对核 DNA 进行琼脂糖电泳，可显示以 180-200bp 为基4 数的 DNA ladder（梯状带纹）的特征。
相比之下，细胞坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早 期即丧失质膜完整性，各种细胞器膨胀，进而质膜崩解释放出其中的内容物，引起炎 症反应，坏死过程中细胞核 DNA 虽也降解，但由于存在各种长度不等的 DNA 片断，不 能形成梯状带纹，而呈弥散状。一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋 亡，通常这些因素在诱导凋亡的同时，也可产生细胞坏死，这取决于损伤的剧烈程度 和细胞本身对刺激的敏感程度。
红茂草富含异喹啉类生物碱，经研究发现红茂草药液对 HeLa 细胞的半数抑制浓 度（IC50）为 3.67µg/µL。3.1~3.7μg/ml 范围内作用 12 小时，细胞空泡化现象严重， 发生裂解死亡。本实验用 4μg/ml 红茂草生物碱在体外诱导培养的 HeLa 细胞发生凋 亡，有少数细胞发生坏死。
用 Hoechst33342 和碘化丙啶（PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死 及正常细胞。细胞膜是具备选择性的生物膜，生物染料 PI 不能穿过质膜。当细胞坏 死时，质膜不完整，PI 就进入细胞内部，它可嵌入到 DNA 或 RNA 中，使坏死细胞着 色，而凋亡细胞和活细胞不着色。Hoechst33342 是一种活性荧光染料且毒性较弱， 它与 DNA 特异结合（主要结合于 A-T）碱基区），可以区别显示凋亡细胞和活细胞。 此外，凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。
项目简介
传代培养是组织培养常规保种方法之一。贴壁细胞生长增殖形成单层细胞后，会 进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不足或密度过大，发生接触 抑制，并引起营养物质枯竭和代谢产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。这时需 要进行分离培养，细胞由原培养瓶按一定比例稀释后，分种到新的培养瓶中继续培养， 这一过程就叫细胞传代。胰酶是一种蛋白酶，通过在特定位置上降解蛋白，将细胞膜 和培养皿壁结合处蛋白降解，使两者分离，贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细 胞悬液，然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。传代要在严格的无菌条件下进 行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡 普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。细胞凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系 列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋 亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上，凋亡细胞与周围细胞脱离接触， 细胞变圆，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈团块状或新 月状分布、内质网和细胞膜进一步融合将细胞分成多个完整包裹的凋亡小体，凋亡小 体最后被吞噬细胞吞噬消化。在生物化学上，多数细胞凋亡的过程中，内源性核酸内 切酶活化，活性增加。核 DNA 随机地在核小体的连接部位被酶切断，降解为 180-200bp 或它的整倍数的各种片断。如果对核 DNA 进行琼脂糖电泳，可显示以 180-200bp 为基4 数的 DNA ladder（梯状带纹）的特征。
相比之下，细胞坏死是细胞处于剧烈损伤条件下发生的细胞死亡。细胞在坏死早 期即丧失质膜完整性，各种细胞器膨胀，进而质膜崩解释放出其中的内容物，引起炎 症反应，坏死过程中细胞核 DNA 虽也降解，但由于存在各种长度不等的 DNA 片断，不 能形成梯状带纹，而呈弥散状。一些温和的损伤刺激及一些抗肿瘤药物可诱导细胞凋 亡，通常这些因素在诱导凋亡的同时，也可产生细胞坏死，这取决于损伤的剧烈程度 和细胞本身对刺激的敏感程度。
红茂草富含异喹啉类生物碱，经研究发现红茂草药液对 HeLa 细胞的半数抑制浓 度（IC50）为 3.67µg/µL。3.1~3.7μg/ml 范围内作用 12 小时，细胞空泡化现象严重， 发生裂解死亡。本实验用 4μg/ml 红茂草生物碱在体外诱导培养的 HeLa 细胞发生凋 亡，有少数细胞发生坏死。
用 Hoechst33342 和碘化丙啶（PI）对细胞进行双重染色，可以区别凋亡、坏死 及正常细胞。细胞膜是具备选择性的生物膜，生物染料 PI 不能穿过质膜。当细胞坏 死时，质膜不完整，PI 就进入细胞内部，它可嵌入到 DNA 或 RNA 中，使坏死细胞着 色，而凋亡细胞和活细胞不着色。Hoechst33342 是一种活性荧光染料且毒性较弱， 它与 DNA 特异结合（主要结合于 A-T）碱基区），可以区别显示凋亡细胞和活细胞。 此外，凡是看到有凋亡小体的细胞都是凋亡细胞。
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细胞生物学虚拟仿真实验课程建设
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